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技術(shù)服務(wù)建設(shè)

圓環(huán)防控新理念

【 發(fā)布時(shí)間:2016-05-18 】 【 點(diǎn)擊次數(shù):58 】 【 所屬分類:技術(shù)服務(wù)建設(shè)】

2014年7月至2015年底的疾病檢出率
為什么在免疫場(chǎng)中圓環(huán)久防不???
 
(1)圓環(huán)盲檢率達(dá)33%
(2)臨床不發(fā)病,但仍有散毒
(3)毒株有變異,PCV2d型毒株開始出現(xiàn)
致病力更強(qiáng)的PCV2d型的病毒毒株開始出現(xiàn)
 
適者生存
  • 是否是疫苗加速了變異?可能的原因是疫苗沒(méi)有切斷病原的傳播
 
1、 圓環(huán)病毒的水平傳播途徑
水平傳播途徑---糞便排毒,仔豬哺乳期通過(guò)母豬感染;
水平感染途徑---仔豬經(jīng)呼吸道腸道等黏膜途徑感染;
病毒繁殖產(chǎn)所---前期在黏膜中繁殖,后期感染至臟器;
黏膜(呼吸道、腸道上皮)是圓環(huán)病毒感染與防控的第一關(guān)
2、目前的防控手段---消毒劑無(wú)效,病毒循環(huán)期長(zhǎng)
抵抗力較強(qiáng):耐高溫,耐酸堿;
在豬糞中存活6個(gè)月仍具有感染性
                              ----豬病學(xué)第十版
圓環(huán)為無(wú)囊膜病毒,對(duì)消毒劑和有機(jī)溶劑不敏感
糞便中的圓環(huán)病毒來(lái)自于腸道感染,不能清除腸道中的病原則無(wú)法降低豬場(chǎng)的感染壓力
3、滅活疫苗無(wú)法清除腸道中的圓環(huán)病毒
世界公認(rèn)疫苗是控制圓環(huán)病毒病的有效方法之一;
滅活苗的理論基礎(chǔ):
  • 產(chǎn)生的抗體進(jìn)入血液循環(huán),阻止圓環(huán)病毒通過(guò)血液循環(huán)感染臟器;
 
4、體液免疫的局限性
體液免疫對(duì)圓環(huán)病的防控治標(biāo)不治本:
1、抗體主要為IgG,無(wú)法清除腸道中的PCV病毒;
2、產(chǎn)生作用較慢,需要30天以上才能建立保護(hù);
3、空窗期長(zhǎng),50日齡前仔豬無(wú)主動(dòng)的黏膜保護(hù);
目前免疫場(chǎng)的問(wèn)題---病原循環(huán)感染期長(zhǎng)
(1)圓環(huán)病毒耐性強(qiáng),豬場(chǎng)存活期長(zhǎng);
(2)體液免疫起效遲緩,存在空窗期;
(3)難以切斷病毒通過(guò)口鼻途徑傳播;
 
體液免疫治標(biāo)不治本,
仔豬在哺乳期通過(guò)母豬排毒感染,哺乳期仔豬的感染壓力,決定了保育期的生長(zhǎng)效率
降低哺乳仔豬的感染壓力需要黏膜免疫
  • 機(jī)體50%以上的淋巴組織位于粘膜系統(tǒng)
  • 包括消化道、呼吸道、泌尿生殖道表面
  • 起效快,2h-3天產(chǎn)生抗體,5-7天建立保護(hù)
  • SIgA是主要的保護(hù)性抗體,進(jìn)入黏膜系統(tǒng)循環(huán)
 

#p#副標(biāo)題#e#
 
滴鼻免疫
  •  偽狂犬的滴鼻免疫
  •  支原體的噴鼻免疫
 
滴鼻免疫優(yōu)點(diǎn)
  • 避開母源抗體的干擾
  • 滴鼻后快速建立有效的黏膜免疫,封閉野毒感染的門戶
  • 在急性感染期可以有效控制PRV的復(fù)制和排毒過(guò)程
  • 針對(duì)偽狂犬最有效的接種方式為滴鼻免疫,在獲得性被動(dòng)免疫存在的情況下,鼻內(nèi)接種的方法優(yōu)于肌肉注射                                                                                  
                                               --------《豬病學(xué)》第9版中文版第475頁(yè)
體液免疫與黏膜免疫的區(qū)別
 
黏膜與體液免疫各有優(yōu)勢(shì),不相互影響,不能相互替代;
黏膜免疫適用于快速建立保護(hù),降低病原通過(guò)黏膜感染的機(jī)率;
體液免疫發(fā)揮作用慢,可建立較為堅(jiān)實(shí)的保護(hù),對(duì)于育肥期發(fā)揮更為重要的作用
圓環(huán)全防衛(wèi)---降低感染壓力
體液免疫:
  • 降低母豬病毒血癥,切斷垂直傳播
  • 為仔豬特別是育肥期建立持久保護(hù)
黏膜免疫:
  • 降低母豬腸道排毒,降低排毒機(jī)率
  • 快速建立黏膜免疫降低被感染可能
 
  • 理念:通過(guò)口服加注射,全防衛(wèi)防控圓環(huán),切斷感染源,降低感染壓力;
 
由英國(guó)皇家科學(xué)院開發(fā),口服使用,刺激機(jī)體產(chǎn)生IgA,可顯著降低圓環(huán)的排毒,降低感染壓力;
乳酸菌(lactic acid bacteria,LAB)是一類定植于腸道、能利用碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的革蘭氏陽(yáng)性菌的總稱,已在世界范圍內(nèi)被公認(rèn)為“Generally Recognized as Safe(GRAS)”等級(jí)的食品微生物。
 
乳酸菌疫苗的優(yōu)勢(shì)
  • 安全性高;
  • 具有免疫佐劑的作用,提高抗原免疫原性;
  • 高效表達(dá);
  • 在體內(nèi)定植,保持蛋白的表達(dá)活性,緩釋效應(yīng);
乳酸菌疫苗具有佐劑效應(yīng)
乳酸菌(以金黃葡萄球菌例)能夠有效刺激NK細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子。
 
乳酸菌疫苗具有佐劑效應(yīng)
乳酸菌與單核細(xì)胞協(xié)同作用,激活NK細(xì)胞活性。
 
 
乳酸菌疫苗具有佐劑效應(yīng)
 
總結(jié):乳酸菌能夠誘導(dǎo)NK細(xì)胞產(chǎn)生INF-γ等相關(guān)免疫因子,提高免疫球蛋白水平,調(diào)節(jié)機(jī)體免疫狀態(tài),無(wú)關(guān)乳酸菌的活性。
抗原高效表達(dá)

Martin 等人將nisRK 整合進(jìn)L. casei
ATCC393 染色體中, 以β-葡糖醛酸酶(g us)基因作為報(bào)告基因, 構(gòu)建了食品級(jí)NICE 系統(tǒng)。
將引起人胃腸炎的Norwalk 病毒的主要抗原蛋白VP60 結(jié)構(gòu)蛋白基因置于nisA 啟動(dòng)子的下游,成功地高效表達(dá)了抗原蛋白VP60。
 

#p#副標(biāo)題#e#
乳酸菌的益生功能
  • 防治乳糖不耐癥
 
  • 防治腹瀉
  • 微生態(tài)制劑治療法:益生菌與腸出血大腸桿菌、霍亂弧菌等致病菌競(jìng)爭(zhēng)在人腸上皮細(xì)胞上的黏附位點(diǎn),通過(guò)生物拮抗抑制腸道致病菌的生長(zhǎng)和代謝活性,調(diào)節(jié)腸道菌群組成來(lái)發(fā)揮治療作用。
乳酸菌的益生功能
微生態(tài)制劑治療法:益生菌與腸出血大腸桿菌、霍亂弧菌等致病菌競(jìng)爭(zhēng)在人腸上皮細(xì)胞上的黏附位點(diǎn),通過(guò)生物拮抗抑制腸道致病菌的生長(zhǎng)和代謝活性,調(diào)節(jié)腸道菌群組成來(lái)發(fā)揮治療作用。
乳酸菌的益生功能
  • 防治消化性潰瘍
      幽門螺桿菌感染是消化性潰瘍的主要致病原因。乳酸菌中嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌等分泌物能夠有效抑制幽門螺桿菌的生長(zhǎng),其中干酪乳桿菌競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合胃黏膜上皮細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn),加氏乳桿菌產(chǎn)生D-L乳酸誘導(dǎo)幽門螺桿菌休眠。
  • 抑制致病菌
      乳酸菌產(chǎn)生的乳酸、H2O2、細(xì)菌素具有廣譜抑菌作用。
  • 增強(qiáng)免疫
    乳酸菌可通過(guò)增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞(單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)、多形核白細(xì)胞的活力,刺激單核因子等效應(yīng)分子產(chǎn)生,促進(jìn)非特異性免疫系統(tǒng)活性。
乳酸菌疫苗應(yīng)用
 
乳酸工程菌平臺(tái)---圓環(huán)Cap蛋白表達(dá)載體
益生菌為載體,攜帶通過(guò)胃腸酸性環(huán)境;
定植腸道,激活黏膜免疫系統(tǒng);
兼具亞單位和DNA疫苗作用
封閉水平感染途徑
 
實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
1.1 主要保護(hù)性蛋白CAP蛋白含量
(1)材料與方法

根據(jù)西班牙INGEZIM  PCV  DAS 豬圓環(huán)(PCV2)雙抗夾心ELISA抗原檢測(cè)試劑盒檢測(cè)圓環(huán)試驗(yàn)所用的樣品。
將每份檢測(cè)樣品按1:1、1:5、1:25、1:50、1:100、1:200、1:400、1:800進(jìn)行倍比稀釋,加入到加樣孔中;孵育洗滌后加入結(jié)合物(抗PCV2核蛋白單抗-HPPO),孵育洗滌顯色,于酶標(biāo)儀檢測(cè)OD450值
 
Cap蛋白含量檢測(cè)結(jié)果
 
按陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品換算,
口服乳酸菌疫苗的Cap蛋白為4.98ug/億菌;
 
1.1 圓環(huán)小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型評(píng)價(jià)
(1)試驗(yàn)?zāi)康模涸u(píng)價(jià)用陰性小鼠試驗(yàn),口服圓清后是否能夠產(chǎn)生特異性圓環(huán)抗體;
(2)試驗(yàn)步驟:分五組,每組五只,分組及首次免疫后28天分別取血液檢測(cè),方案如下:
試驗(yàn)分組及飼養(yǎng)
 
 
試驗(yàn)采血
 
2)試驗(yàn)結(jié)果及分析
結(jié)論:
1、用雙陰性的小鼠做實(shí)驗(yàn),兩次的數(shù)據(jù)表明口服疫苗可以產(chǎn)生良好的抗體。
1.3“一針一服”免疫攻毒試驗(yàn)
IPMA結(jié)果(稀釋200倍)
 
攻毒后剖檢結(jié)果
 
熒光定量PCR檢測(cè)各臟器中的病毒載量
1.4 “一針一服”田間試驗(yàn)---感染嚴(yán)重場(chǎng)(未免任何疫苗)
注:1、豬場(chǎng)為圓環(huán)嚴(yán)重感染場(chǎng),存在明顯的圓環(huán)感染;
        2、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各300頭;
結(jié)論:
1、試驗(yàn)結(jié)果表明,一針一服在陽(yáng)性豬場(chǎng)使用時(shí)能顯著降低病毒血癥,提高仔豬的生長(zhǎng)率;
 2、一服一針圓清組增重顯著(腹瀉比例明顯降低)
“一服一針”田間試驗(yàn)--免疫滅活疫苗的豬場(chǎng)
 
注:
1、病毒血癥檢測(cè)樣本量為每組40頭;
結(jié)論:感染壓力小的場(chǎng),一針一服后基本可以阻斷病原的水平傳播;
1.5、 圓環(huán)疫苗的免疫持續(xù)期
 
結(jié)論:1、滅活苗兩次免疫持續(xù)期可達(dá)3個(gè)月;
      2、一針一服的免疫持續(xù)期超過(guò)4個(gè)月;

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