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技術(shù)服務(wù)建設(shè)

圓環(huán)防控新理念

【 發(fā)布時(shí)間：2016-05-18 】 【 點(diǎn)擊次數(shù)：58 】 【 所屬分類：技術(shù)服務(wù)建設(shè)】

2014年7月至2015年底的疾病檢出率
為什么在免疫場(chǎng)中圓環(huán)久防不??？
 
（1）圓環(huán)盲檢率達(dá)33%
（2）臨床不發(fā)病，但仍有散毒
（3）毒株有變異，PCV2d型毒株開始出現(xiàn)
致病力更強(qiáng)的PCV2d型的病毒毒株開始出現(xiàn)
 
適者生存
  • 是否是疫苗加速了變異？可能的原因是疫苗沒(méi)有切斷病原的傳播
 
1、 圓環(huán)病毒的水平傳播途徑
水平傳播途徑---糞便排毒，仔豬哺乳期通過(guò)母豬感染；
水平感染途徑---仔豬經(jīng)呼吸道腸道等黏膜途徑感染；
病毒繁殖產(chǎn)所---前期在黏膜中繁殖，后期感染至臟器；
黏膜（呼吸道、腸道上皮）是圓環(huán)病毒感染與防控的第一關(guān)
2、目前的防控手段---消毒劑無(wú)效，病毒循環(huán)期長(zhǎng)
抵抗力較強(qiáng)：耐高溫，耐酸堿；
在豬糞中存活6個(gè)月仍具有感染性
                              ----豬病學(xué)第十版
圓環(huán)為無(wú)囊膜病毒，對(duì)消毒劑和有機(jī)溶劑不敏感
糞便中的圓環(huán)病毒來(lái)自于腸道感染，不能清除腸道中的病原則無(wú)法降低豬場(chǎng)的感染壓力
3、滅活疫苗無(wú)法清除腸道中的圓環(huán)病毒
世界公認(rèn)疫苗是控制圓環(huán)病毒病的有效方法之一；
滅活苗的理論基礎(chǔ)：
  • 產(chǎn)生的抗體進(jìn)入血液循環(huán)，阻止圓環(huán)病毒通過(guò)血液循環(huán)感染臟器；
 
4、體液免疫的局限性
體液免疫對(duì)圓環(huán)病的防控治標(biāo)不治本：
1、抗體主要為IgG，無(wú)法清除腸道中的PCV病毒；
2、產(chǎn)生作用較慢，需要30天以上才能建立保護(hù)；
3、空窗期長(zhǎng)，50日齡前仔豬無(wú)主動(dòng)的黏膜保護(hù)；
目前免疫場(chǎng)的問(wèn)題---病原循環(huán)感染期長(zhǎng)
（1）圓環(huán)病毒耐性強(qiáng)，豬場(chǎng)存活期長(zhǎng)；
（2）體液免疫起效遲緩，存在空窗期；
（3）難以切斷病毒通過(guò)口鼻途徑傳播；
 
體液免疫治標(biāo)不治本，
仔豬在哺乳期通過(guò)母豬排毒感染，哺乳期仔豬的感染壓力，決定了保育期的生長(zhǎng)效率
降低哺乳仔豬的感染壓力需要黏膜免疫
  • 機(jī)體50%以上的淋巴組織位于粘膜系統(tǒng)
  • 包括消化道、呼吸道、泌尿生殖道表面
  • 起效快，2h-3天產(chǎn)生抗體，5-7天建立保護(hù)
  • SIgA是主要的保護(hù)性抗體，進(jìn)入黏膜系統(tǒng)循環(huán)
 

#p#副標(biāo)題#e#
 
滴鼻免疫
  •  偽狂犬的滴鼻免疫
  •  支原體的噴鼻免疫
 
滴鼻免疫優(yōu)點(diǎn)
  • 避開母源抗體的干擾
  • 滴鼻后快速建立有效的黏膜免疫，封閉野毒感染的門戶
  • 在急性感染期可以有效控制PRV的復(fù)制和排毒過(guò)程
  • 針對(duì)偽狂犬最有效的接種方式為滴鼻免疫，在獲得性被動(dòng)免疫存在的情況下，鼻內(nèi)接種的方法優(yōu)于肌肉注射                                                                                  
                                               --------《豬病學(xué)》第9版中文版第475頁(yè)
體液免疫與黏膜免疫的區(qū)別
 
黏膜與體液免疫各有優(yōu)勢(shì)，不相互影響，不能相互替代；
黏膜免疫適用于快速建立保護(hù)，降低病原通過(guò)黏膜感染的機(jī)率；
體液免疫發(fā)揮作用慢，可建立較為堅(jiān)實(shí)的保護(hù)，對(duì)于育肥期發(fā)揮更為重要的作用
圓環(huán)全防衛(wèi)---降低感染壓力
體液免疫：
  • 降低母豬病毒血癥，切斷垂直傳播
  • 為仔豬特別是育肥期建立持久保護(hù)
黏膜免疫：
  • 降低母豬腸道排毒，降低排毒機(jī)率
  • 快速建立黏膜免疫降低被感染可能
 
  • 理念：通過(guò)口服加注射，全防衛(wèi)防控圓環(huán)，切斷感染源，降低感染壓力；
 
由英國(guó)皇家科學(xué)院開發(fā)，口服使用，刺激機(jī)體產(chǎn)生IgA，可顯著降低圓環(huán)的排毒，降低感染壓力；
乳酸菌（lactic acid bacteria，LAB）是一類定植于腸道、能利用碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的革蘭氏陽(yáng)性菌的總稱，已在世界范圍內(nèi)被公認(rèn)為“Generally Recognized as Safe（GRAS）”等級(jí)的食品微生物。
 
乳酸菌疫苗的優(yōu)勢(shì)
  • 安全性高；
  • 具有免疫佐劑的作用，提高抗原免疫原性；
  • 高效表達(dá)；
  • 在體內(nèi)定植，保持蛋白的表達(dá)活性，緩釋效應(yīng)；
乳酸菌疫苗具有佐劑效應(yīng)
乳酸菌（以金黃葡萄球菌例）能夠有效刺激NK細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子。
 
乳酸菌疫苗具有佐劑效應(yīng)
乳酸菌與單核細(xì)胞協(xié)同作用，激活NK細(xì)胞活性。
 
 
乳酸菌疫苗具有佐劑效應(yīng)
 
總結(jié)：乳酸菌能夠誘導(dǎo)NK細(xì)胞產(chǎn)生INF-γ等相關(guān)免疫因子，提高免疫球蛋白水平，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫狀態(tài)，無(wú)關(guān)乳酸菌的活性。
抗原高效表達(dá)
Martin 等人將nisRK 整合進(jìn)L. casei
ATCC393 染色體中, 以β-葡糖醛酸酶(g us)基因作為報(bào)告基因, 構(gòu)建了食品級(jí)NICE 系統(tǒng)。
將引起人胃腸炎的Norwalk 病毒的主要抗原蛋白VP60 結(jié)構(gòu)蛋白基因置于nisA 啟動(dòng)子的下游,成功地高效表達(dá)了抗原蛋白VP60。
 

#p#副標(biāo)題#e#
乳酸菌的益生功能
  • 防治乳糖不耐癥
 
  • 防治腹瀉
  • 微生態(tài)制劑治療法：益生菌與腸出血大腸桿菌、霍亂弧菌等致病菌競(jìng)爭(zhēng)在人腸上皮細(xì)胞上的黏附位點(diǎn)，通過(guò)生物拮抗抑制腸道致病菌的生長(zhǎng)和代謝活性，調(diào)節(jié)腸道菌群組成來(lái)發(fā)揮治療作用。
乳酸菌的益生功能
微生態(tài)制劑治療法：益生菌與腸出血大腸桿菌、霍亂弧菌等致病菌競(jìng)爭(zhēng)在人腸上皮細(xì)胞上的黏附位點(diǎn)，通過(guò)生物拮抗抑制腸道致病菌的生長(zhǎng)和代謝活性，調(diào)節(jié)腸道菌群組成來(lái)發(fā)揮治療作用。
乳酸菌的益生功能
  • 防治消化性潰瘍
      幽門螺桿菌感染是消化性潰瘍的主要致病原因。乳酸菌中嗜酸乳桿菌、植物乳桿菌、干酪乳桿菌等分泌物能夠有效抑制幽門螺桿菌的生長(zhǎng)，其中干酪乳桿菌競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合胃黏膜上皮細(xì)胞結(jié)合位點(diǎn)，加氏乳桿菌產(chǎn)生D-L乳酸誘導(dǎo)幽門螺桿菌休眠。
  • 抑制致病菌
      乳酸菌產(chǎn)生的乳酸、H2O2、細(xì)菌素具有廣譜抑菌作用。
  • 增強(qiáng)免疫
    乳酸菌可通過(guò)增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞（單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）、多形核白細(xì)胞的活力，刺激單核因子等效應(yīng)分子產(chǎn)生，促進(jìn)非特異性免疫系統(tǒng)活性。
乳酸菌疫苗應(yīng)用
 
乳酸工程菌平臺(tái)---圓環(huán)Cap蛋白表達(dá)載體
益生菌為載體，攜帶通過(guò)胃腸酸性環(huán)境；
定植腸道，激活黏膜免疫系統(tǒng)；
兼具亞單位和DNA疫苗作用
封閉水平感染途徑
 
實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
1.1 主要保護(hù)性蛋白CAP蛋白含量
（1）材料與方法
根據(jù)西班牙INGEZIM  PCV  DAS 豬圓環(huán)（PCV2）雙抗夾心ELISA抗原檢測(cè)試劑盒檢測(cè)圓環(huán)試驗(yàn)所用的樣品。
將每份檢測(cè)樣品按1：1、1：5、1：25、1：50、1：100、1：200、1：400、1：800進(jìn)行倍比稀釋，加入到加樣孔中；孵育洗滌后加入結(jié)合物（抗PCV2核蛋白單抗-HPPO），孵育洗滌顯色，于酶標(biāo)儀檢測(cè)OD450值
 
Cap蛋白含量檢測(cè)結(jié)果
 
按陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品換算，
口服乳酸菌疫苗的Cap蛋白為4.98ug/億菌；
 
1.1 圓環(huán)小鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型評(píng)價(jià)
（1）試驗(yàn)?zāi)康模涸u(píng)價(jià)用陰性小鼠試驗(yàn)，口服圓清后是否能夠產(chǎn)生特異性圓環(huán)抗體；
（2）試驗(yàn)步驟：分五組，每組五只，分組及首次免疫后28天分別取血液檢測(cè)，方案如下：
試驗(yàn)分組及飼養(yǎng)
 
 
試驗(yàn)采血
 
2）試驗(yàn)結(jié)果及分析
結(jié)論：
1、用雙陰性的小鼠做實(shí)驗(yàn)，兩次的數(shù)據(jù)表明口服疫苗可以產(chǎn)生良好的抗體。
1.3“一針一服”免疫攻毒試驗(yàn)
IPMA結(jié)果(稀釋200倍)
 
攻毒后剖檢結(jié)果
 
熒光定量PCR檢測(cè)各臟器中的病毒載量
1.4 “一針一服”田間試驗(yàn)---感染嚴(yán)重場(chǎng)（未免任何疫苗）
注：1、豬場(chǎng)為圓環(huán)嚴(yán)重感染場(chǎng)，存在明顯的圓環(huán)感染；
        2、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組各300頭；
結(jié)論：
1、試驗(yàn)結(jié)果表明，一針一服在陽(yáng)性豬場(chǎng)使用時(shí)能顯著降低病毒血癥，提高仔豬的生長(zhǎng)率；
 2、一服一針圓清組增重顯著（腹瀉比例明顯降低）
“一服一針”田間試驗(yàn)--免疫滅活疫苗的豬場(chǎng)
 
注:
1、病毒血癥檢測(cè)樣本量為每組40頭；
結(jié)論：感染壓力小的場(chǎng)，一針一服后基本可以阻斷病原的水平傳播；
1.5、 圓環(huán)疫苗的免疫持續(xù)期
 
結(jié)論：1、滅活苗兩次免疫持續(xù)期可達(dá)3個(gè)月；
      2、一針一服的免疫持續(xù)期超過(guò)4個(gè)月；
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走進(jìn)久久和牧 企業(yè)概況 總裁致辭 企業(yè)榮譽(yù) 企業(yè)文化 子公司 公司掠影 產(chǎn)品價(jià)值 制造理念 產(chǎn)品介紹

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